基因工程pdf

A. 《轉基因產品通用檢測方法》pdf下載在線閱讀全文，求百度網盤雲資源

《轉基因產品通用檢測方法》網路網盤pdf最新全集下載:

鏈接:https://pan..com/s/16m3pG13H2e2QSsLjYo0hGA

簡介：轉基因食品指的是利用轉基因生物技術（轉基因生物技術是指在特定生物物種基因組導入外源基因並使其有效地表達相應產物的新型育種技術）獲得的轉基因生物品系，並以該轉基因生物為直接食品或為原料加工生產的食品稱為轉基因食品。

B. 《轉基因作物安全性爭論與事實》pdf下載在線閱讀，求百度網盤雲資源

《轉基因作物安全性爭論與事實》電子書網盤下載免費在線閱讀

鏈接：https://pan..com/s/1IQhwQrnmqYl0R8s3BEnuzg

書名：轉基因作物安全性爭論與事實

C. 轉基因的研究性學習

文章名：基因工程和轉基因食品的安全性問題
內容：
本文介紹了基因工程和轉基因食品的發展和現狀，總結了轉基因食品帶來的食品本身、轉基因作物的利弊分析
下載地址：http://www.lib.cau.e.cn/zjy/023.PDF

文章名：關注轉基因
內容：與所有技術一樣，轉基因技術也有利亦有弊，但目前對這種利弊的認識還不夠透徹。
下載地址：http://www.chem.pku.e.cn/bianj/Web/paper/05/43.pdf

注意：下載後要有Adobe Reader閱讀器才能看。

D. 7. 基因工程載體

特殊用途載體

載體（Vectors）DNA：1）獨立的一個包括啟動子（promoter)、編碼區（encoding region)和終止子（terminator)的基因，or 組成基因的某個含碰元件，一般是不可以進入受體細胞的；2）採用理化方法進入細胞後，也不容易在受體細胞內維持。所以，通過不同途徑能將承載的外源DNA片段帶入受體細胞，並在其中得以維持的DNA分子稱為基因工程載體。

載體（Vectors）定義：在基因工程操作中，把能攜帶外源DNA進入受體細胞的DNA分子叫載體。

多克隆位點(multiple cloning site)ori復制起始點遺傳標記pUCMCSAmpr運送外源基因高效轉入受體細胞2、為外源基因提供復制能力或整合能力3、為外源基因的擴增或表達提供條件

載體的功能運送外源基因高效轉入受體細胞為外源基因提供復制能力或整合能力為外源基因的擴增或表達提供必要的條件

目的基因能否有效轉入受體細胞，並在其中維持高效表達，在很大程度上決定於載體。

基因工此老辯程對載體的要求（1）在宿主細胞內能獨立復制，ori。（2）有選擇性標記Ampr、Tetr、Kanr等。

（3）多克隆位點：外源基因插入的單一限制酶位點。（4）分子量小，可容納較大的外源基因片段。（5）拷貝數多，方便外源基因在細胞內大量擴增。外源DNA插入其中不影響載體的復制且切點是單一的，這樣可將多個外源DNA 片段插入其中。避免基因的非控制性擴散。（6）具有對受體細胞的可轉移性。（7）具有較好的安全性，不能任意轉移。

大腸桿菌質粒載體pBR322結構圖克隆位點克隆位點遺傳標記基因復制起點 

載體的種類按功能分類克隆載體克隆一個基因或DNA片斷表達載體用於一個基因的蛋白表達整合載體把一個基因插入到染色體組中

表達載體用於一個基因的蛋白表達整合載體把一個基因插入到染色體組中按來源分類質粒載體噬菌體載體柯斯質粒載體人工染色體載體00 

載體的種類和特徵質粒*   受體細胞結構插入片斷舉例E.coli   環狀＜8kb pUC18/19 , T-載體等λ噬菌體線狀

EMBL系列，λ gt系列絲狀噬菌體及噬菌粒＜10 kbM13mp系列粘粒載體35- 45kbpJB8,c2RB, pcoslEMBL, pWE15/16, pCVBAC (Bacterial Artificial Chromosome)≈300 kbPel oBAC系列YAC (Yeast Artificial chromosome )酵母細胞線性染色體kbMAC (Mammalian Artificial Chromosome)哺乳類細胞＞1000 kb病毒載體動物細胞SV40 載體，昆蟲桿狀病毒載體穿梭載體和細菌pSVK3質粒，PBV, Ti質粒

第一節克隆載體1.   質粒載體（plasimid vectors）2.   噬菌體載體（phage vectors）

第一節克隆載體1. 質粒載體（plasimid vectors）2. 噬菌體載體（phage vectors）3. 柯斯質粒載體（cosmid vectors）4. 人工染色體載體（B/Y/HAC）

質粒的生物學特性（1）質粒的概念的裸露的環狀雙鏈DNA分子，比病毒更簡單。

質粒是一種廣泛從在於細菌細胞中染色體以外的能自主的復制的裸露的環狀雙鏈DNA分子，比病毒更簡單。並不是寄主生長所必需的，但可以賦予寄主某些抵禦外界環境因素不利影響的能力（帶有抗性基因等）。

（2）質粒的大小差異很大，最小的只有1kb,只能編碼中等大小的2-3種蛋森缺白質分子，最大的達到200kb。質粒的生存在寄主細胞中「友好」地「借居」，它可以賦予寄主一些非染色體控制的遺傳性狀，以利於寄主的生存。比如，對抗菌素的抗性，對重金屬的抗性等。（3）質粒的生存

嚴緊型復制控制的質粒（stringent plasmid）(拷貝數少，為1-5個) 

（4）質粒的自主復制性質粒能利用寄主細胞的DNA復制系統進行自主復制。質粒DNA上的復制子結構決定了質粒與寄主的對應關系。根據在每個細胞中的分子數（拷貝數）多寡，質粒可分為兩大復制類型：嚴緊型復制控制的質粒（stringent plasmid）(拷貝數少，為1-5個)鬆弛型復制控制的質粒（relaxed）(拷貝數多，可達10-200個拷貝)因此，作為載體的質粒應該是鬆弛型的。

（5）質粒的不相容性兩個質粒在同一宿主中不能共存的現象稱質粒的不相容性。具有不相容性的質粒組成的群體稱為不相容群，一般具有相同的復制子。

（6）質粒的可轉移性在天然條件下，很多天然質粒都可通過細菌接合作用從一種宿主細胞內轉移到另外一種宿主內，這種轉移依賴於質粒上的tra基因產物。Conjugative plasmid 接合型質粒（自我轉移的質粒）：質粒可從一個細胞自發轉移到另一個細胞。Non Conjugative plasmid 非接合型質粒（不能自我轉移的質粒）：由於失去控制細菌配對和自我轉移的基因，質粒不能從一個細胞自發的轉移到另一個細胞。基因工程一般只能利用非接接合型質粒，保證分子操作過程中質粒在細胞中的穩定性。

Tra protein from conjugative plasmid

bom siteMob genemob mRNAMob proteinopenrecipient cellhelper plasmid即mob基因的產物可打開非接合質粒的bom 位點(oriT位點)，藉助接合質粒tra基因的產物，使非接合質粒被動遷移到受體細胞中，這種現象稱為遷移作用(mobilization)。

質粒DNA的tra基因E.Coli產生菌毛宿主與受體細胞結合遺傳物在細胞之間轉移（指令）（遷移）大腸桿菌接合（conjunction）

（7）攜帶特殊的遺傳標記野生型的質粒DNA上往往攜帶一個或多個遺傳標記基因，這使得寄主生物產生正常生長非必需的附加性狀，包括：物質抗性抗生素、重金屬離子、毒性陰離子、有機物物質合成抗生素、細菌毒素、有機鹼這些標記基因對DNA重組分子的篩選具有重要意義

遺傳標記基因定義:在基因工程中使用與選擇重組體DNA轉化細胞的基因1. 指示外源DNA分子（載體或重組分子）是否進入宿主細胞2. 指示外源DNA分子是否插入載體分子形成了重組子標記基因的作用

標記基因的種類1.   抗性標記基因（可直接用於選擇轉化子）

a. 抗生素抗性基因: Apr ，Tcr ，Cmr，Kanr，G418r，Hygr ，Neorb. 重金屬抗性基因: Cur ，Znr ，Cdrc. 代謝抗性基因: TK，抗除草劑基因2. 營養標記基因（可直接用於選擇轉化子）主要是參與氨基酸，核苷酸及其他必需營養物合成酶類的基因，這類基因在酵母轉化中使用最頻繁，如TRP1，URA3，LEU2，HIS4等。3. 生化標記基因其表達產物可催化某些易檢測的生化反應，如lacZ，GUS，CAT4. 噬菌斑

1.四環素抗性基因（Tcr）Tetracycline 可結合在核糖體30s亞基中的一種蛋白質分子上，抑制核糖體的轉位過程。四環素抗性基因編碼一種399 AAs蛋白質，與細菌細胞膜結合，阻止四環素分子進入細菌細胞。2.氨苄青黴素抗性基因（Apr）Ampicillin可抑制細菌細胞膜上參與細胞壁合成酶類的活性。Apr抗性基因編碼一種分泌到細菌細胞周間質的酶，催化β-內醯胺環的水解，使氨苄青黴素失活。3. 氯黴素抗性基因（Cmr）Chlorophenicol可結合在核糖體50 S亞基上，阻止蛋白質合成。Cmr基因編碼氯黴素乙醯轉移酶，使氯黴素乙醯化，導致乙醯化的氯黴素不能結合在核糖體上。4. 卡那黴素(Kanr), 新黴素(Neor)和G418抗性(G418r)基因Kanamycin，Neomycin和G418均屬脫氧鏈霉胺氨基葡萄糖苷類抗生素，可結合在核糖體上阻止蛋白質的合成。來自轉座子Tn5和Tn903的Kanr抗性基因均可使這類抗生素磷酸化，使之不能進入細胞內。20 

質粒的存在形式有超螺旋、開環雙螺旋和線狀雙螺旋三種。

（8）質粒的存在形式質粒的存在形式有超螺旋、開環雙螺旋和線狀雙螺旋三種。雙螺旋共價閉合環（超螺旋）線狀雙螺旋（兩個裂口）開環雙螺旋（一個裂口）

質粒空間構型與電泳速率同一質粒盡管分子量相同，不同的構型電泳遷移率不同：scDNA最快、l DNA次之、ocDNA最慢。OC L SC 

天然質粒的局限性天然存在的野生型質粒由於分子量大、拷貝數低、單一酶切位點少、遺傳標記不理想等缺陷，不能滿足克隆載體的要求，因此往往需要以多種野生型質粒為基礎進行人工構建。

質粒載體的命名原則人工組建的質粒人工組建的質粒的第一個字母是質粒英文名字（plasmid）的第一個字元p，用小寫。p後有2個字母是大寫，表示質粒的作者和實驗室名稱，再其後為質粒的編號。如pBR322，字母p代表質粒，BR是構建該質粒的研究人員的姓名，322代表…構建的一系質粒的編號。

質粒載體的發展概況第一階段（1977年前）天然質粒和重組質粒的利用，如pSC101, ColE1, pCR, pBR313和pBR322。第二階段增大載體容量（降低載體長度），建立多克隆位點區和新的遺傳標記基因。如pUC系列載體。第三階段完善載體功能以滿足基因工程克隆中的不同要求，如M13mp系列載體，含T3，T7，sp6啟動子載體，表達型載體及各種探針型載體。

質粒載體的構建質粒構建基本策略1.加入合適的選擇標記基因，如兩個以上，易於選擇轉化體2.增加或減少合適的酶切位點，便於重組

3.縮短長度，提高導入效率，增加裝載量4.改變復制子，變嚴緊為鬆弛，變少拷貝為多拷貝5.根據基因工程的特殊要求加裝特殊的基因元件

1、選擇合適的出發質粒: Ori、選擇標記、MCS

質粒構建原則1、選擇合適的出發質粒: Ori、選擇標記、MCS2、正確獲得構建質粒載體的元件：酶切、PCR3、組裝合適的選擇標記基因4、選擇合適的啟動子5、提高外源DNA的容量滅活一些有害基因，比如與質粒移動有關的基因，或影響質粒復制的負調控基因等。6、需要滅活初始質粒上的某些編碼基因7、達到預期目的前提下，構建過程應力求簡單

質粒載體：作為基因工程載體，質粒至少應該具備復制的起始區、選擇標記基因區、多克隆位點等部分。

質粒載體的分類人工構建的質粒根據其功能和用途可分成如下幾類：高拷貝質粒突變拷貝數控制基因拷貝數1000-3000   擴增基因

高拷貝質粒突變拷貝數控制基因拷貝數 擴增基因低拷貝質粒來自pSC101 拷貝數小於10 表達某些毒性基因溫敏質粒在不同溫度下表現出拷貝數、整合等不同性質測序質粒含有測序通用引物互補序列和多酶接頭polylinker整合質粒裝有整合促進基因及位點便於外源基因的整合穿梭質粒裝有針對兩種不同受體的復制子便於基因克隆表達質粒裝有強化外源基因表達的轉錄、翻譯、純化的元件探針質粒裝有報告基因便於啟動子等元件的克隆篩選

質粒載體的分類（1）高拷貝數的質粒載體ColE1、pMB1、pMB9   鬆弛型質粒。具有低分子量、高拷貝數的優點。

具有氯黴素擴增效應：每個細胞的拷貝數1000－3000個！用途：適合大量增殖克隆基因、或需要表達大量的基因產物。

（2）低拷貝數的質粒載體（3）溫控的質粒載體由pSC101派生來的載體。特點是拷貝數低。pLG338、pLG339等

適合於克隆含量過高對寄主代謝有害的基因。減少蛋白質產物對寄主細胞的毒害。（3）溫控的質粒載體一些低拷貝基因是溫度敏感型，如pBEU1、pBEU2溫度低（<37 oC），拷貝數很少；溫度增加（>40 oC），拷貝數很快增加到>1000個。

（4）插入失活型質粒載體如pDF41、pDF42、pBR322。無抗生素抗性抗生素抗性

載體的克隆位點位於其某一個選擇性標記基因內部。外源DNA片段插入會導致選擇記號基因（如tetr、ampr、cmr等）失活。如pDF41、pDF42、pBR322。外源DNA無抗生素抗性抗生素抗性

質粒載體具有直接選擇記號並賦予寄主細胞相應的表型。只有帶有選擇標記基因的轉化菌細胞才能在選擇培養基上生長。

（5）正選擇的質粒載體質粒載體具有直接選擇記號並賦予寄主細胞相應的表型。只有帶有選擇標記基因的轉化菌細胞才能在選擇培養基上生長。可大大降低需要篩選的轉化子的數量，從而減輕實驗的工作量，提高了選擇的敏感性。通過選擇具這種表型特徵的轉化子，便可大大降低需要篩選的轉化子的數量只有帶有選擇標記基因的轉化菌細胞才能在選擇培養基上生長。目前通用的絕大部分質粒載體都是正選擇載體。具有直接選擇記號並賦予寄主細胞相應的表型，直接選擇轉化後的細胞，提高了選擇的敏感性。注意啟動子的性質，終止子、起始密碼、終止密碼的閱讀正確。並能在大腸桿菌細胞中正常轉錄並轉譯成相應蛋白質的克隆載體特稱為表達載體（expression vectors）。一種典型的大腸桿菌表達型質粒載體（圖4-11）的主要組成部分，包括大腸桿菌的啟動子及操縱全點序列、多克隆位點、轉錄及轉譯信號、質粒載體的復制起點及抗菌素抗性基因。

經典的大腸桿菌質粒載體pSC101質粒載體天然質粒，屬嚴緊型低拷貝質粒。9.09 kb。四環素抗性Tetr。

ColE1天然質粒，屬鬆弛型、高拷貝質粒，6.6Kb。有氯黴素擴增效應，每個細胞拷貝

大腸桿菌素（colicin）E1和對E1免疫的基因（immE1）

選擇標記大腸桿菌素（colicin）E1和對E1免疫的基因（immE1）colicin E1能殺死不含ColE1 質粒的菌，形成噬菌斑。•colicin E1能殺死不含ColE1 質粒的菌，形成「噬菌斑」。•唯一的克隆位點EcoR I 正好位於這個基因的內部。可以通過插入失活篩選。

③不被其他細菌的colicin E1所殺死的原因

ceaimmkil結構基因免疫基因溶菌基因②殺死不含有ColE1細菌的原因cea + kil基因產物產生菌對細菌素有自身免疫性大腸桿菌所產生的細菌素稱為大腸菌素(colicin),它除作用於某些型別的大腸桿菌外,還能作用於親緣關系相近的志賀菌、沙門氏菌、克雷伯氏菌和巴氏桿菌等。③不被其他細菌的colicin E1所殺死的原因imm基因

EcoR I位於E1內部，插入外源DNA導致E1失活，使受體菌不能合成E（ColE1-），但仍表現出對E1免疫型（ImmE1+）。

唯一的克隆位點EcoR IEcoR I位於E1內部，插入外源DNA導致E1失活，使受體菌不能合成E（ColE1-），但仍表現出對E1免疫型（ImmE1+）。Colicin E1外源DNA無Colicin用對外源colicin E1的免疫性和自身不能合成colicin E1作選擇，操作非常繁雜。

pBR322：人工構建載體p:質粒；BR：質粒兩位主要構建者姓氏的第一個字母；322：實驗編號三個親本質粒：

pSF2124pMB1pSC101三個親本質粒：pMB1:出發質粒(ColE1)pSF2124: AmprpSC101: Tetr把pBR322用限制性內切酶切去某片段，換上合用的表達組件，就可以構建成工作所需的新載體。4.36kb的環狀雙鏈DNA，鹼基序列已經全部清楚。許多實用的質粒載體都是在pBR322的基礎上改建而成。可見其原型質粒在使用上有優點。

3個會導致Ampr基因失活9個導致Tetr基因失活氨苄青黴素和四環素抗性24個單一克隆位點。

pBR322的優點①雙抗生素抗性選擇標記抗生素抗性基因的插入失活效應是檢測重組體質粒的有效方法，分兩次先後選擇：沒有獲得載體的寄主細胞®在Amp或Tet中都死亡。獲得重組載體的寄主細胞®在Amp或Tet其中之一中死亡。

不含質粒載體含有空質粒載體含有重組質粒載體AmpAmp＋Tet

pBR322重組克隆的篩選重組克隆的「插入失活」篩選方法pBR322—→插入在Tetr中，基因型為Tets 、Ampr——→在含有氨卞青黴素培養基上可生長，在含有四環素培養基上不生長；pBR322—→插入在Ampr中，基因型為Tetr 、Amps、——→在含有氨卞青黴素培養基上不生長，在含有四環素培養基可生長；而在兩種抗生素培養基上都生長的是非重組型。這種在一個基因位點中插入外源DNA片段，從而使該基因活性喪失的現象叫插入失活。

②分子小，克隆能力大③高拷貝數④安全⑤具有較多的單一酶切位點（24種）

長度4363bp，易於純化，可以攜帶6-8Kb的外源DNA片段。③高拷貝數氯黴素擴增之後，每個細胞可1000~3000copies④安全失去了轉移蛋白基因mob（mobilization）。不能通過接合轉移。載體越小越好。>10kb的DNA在純化過程中容易斷裂。缺失流動基因（mob）。這樣，質粒就不會從一個細菌接觸轉移到⑤具有較多的單一酶切位點（24種）

pBR322的缺點保留了轉移蛋白（mob）的作用位點。能夠被ColK質粒編碼的mob蛋白識別，如果再有F質粒的參與，就有可能轉移！

PBR322的改進①刪除mob識別位點（如質粒pBR327、pAT153等）。pAT153：從pBR322上切去HaeII片斷，既除去了mob識別位點，又增加質粒的拷貝數。

②改造EcoR I 位點pBR325：使EcoRI 也成為插入失活型位點。在pBR322位點上接入一段來自噬菌體PICm的HaeII酶切片斷（帶有氯黴素抗性基因cmlr）。cmlr上也帶一個EcoRI位點。

pUC系列載體在pBR322的基礎上改造而成。屬正選擇載體。pUC7、pUC8、pUC9、pUC10、pUC11、pUC18、pUC19

加入一個在5端帶有10個多克隆位點的基因lacZ』

（1）元件來源a .ori來自pBR322質粒的復制起點b.   標記基因（ampr）:pBR322的Ampr基因

Lacz基因編碼的半乳糖苷酶是四聚體。Lacz』基因含有lacz基因的前59個密碼子，a序列，編碼a肽。c. lacz』基因：大腸桿菌lac操縱子DNA區段，編碼β-半乳糖苷酶a-肽鏈，是LacZ氨基端的一個片段.載體用於可編碼半乳糖苷酶羧基端部分序列的宿主細胞。d. MCS 多克隆位點。

（2）克隆位點具有MCS（多克隆位點）區段：位於lacZ』基因的5』端。10個連續的單一限制酶切位點，但它不破壞該基因功能。

有mcs的存在，lacz』基因仍然能編碼a肽。如果外源基因插入此mcs區，該基因失活。

x-gal：5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷，為生色底物，半乳糖苷酶+ x-gal   藍色

菌落藍白選擇的原理：IPTG：異丙基-β-D-硫代半乳糖苷，乳糖類似物，又稱為安慰誘導物，可代替乳糖誘導乳糖操縱子結構基因的表達，即可誘導lacz』所編碼的半乳糖苷酶氨基末端片段（α－肽）的合成。x-gal：5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷，為生色底物，半乳糖苷酶+ x-gal藍色x－gal水解後呈現藍色

α-互補：pUC類載體帶有lacz』基因，編碼半乳糖苷酶氨基端片段（α-肽），此片段與宿主細胞所編碼的羧基端半乳糖苷酶實現基因內互補，形成有功能的半乳糖苷酶，稱α-互補。

α-互補（α-complementation）α-互補是指lacZ 基因上缺失近操縱基因區段的突變體與帶有完整的近操縱基因區段的β-半乳糖苷酶（β -galactosidase ，由1024 個氨基酸組成）陰性的突變體之間實現互補。α-互補是基於在兩個不同的缺陷β-半乳糖苷酶之間可實現功能互補而建立的。大腸桿菌的乳糖lac 操縱子中的lacZ 基因編碼β-半乳糖苷酶，如果lacZ 基因發生突變，則不能合成有活性的β-半乳糖苷酶。例如，lacZ△M15 基因是缺失了編碼β-半乳糖苷酶中第個氨基酸的lacZ 基因，無酶學活性。對於只編碼N-端140 個氨基酸的lacZ 基因（稱為lacZ'），其產物也沒有酶學活性。但這兩個無酶學活性的產物混合在一起時，可恢復β-半乳糖苷酶的活性，實現基因內互補。

菌落藍白斑選擇的原理：在基因克隆時，細菌在含有IPTG和x－gal的培養基中進行培養。IPTG誘導質粒的lacz』基因產生α-肽，同時誘導細菌產生半乳糖苷酶的羧基端片段。兩種片段形成有功能的半乳糖苷酶，從而使x－gal水解，產生藍色物質，使非重組菌落呈現藍色。當外源基因插到質粒的多克隆位點後，使lacz』失活，不能表達α-肽，破壞了互補作用，細胞內無有活性半乳糖苷酶，使帶有重組質粒的細菌將產生白色菌落。

互補顯色反應 

a   具有更小的相對分子質量和更高的拷貝數，平均每個細胞可達500-700個拷貝

PUC載體的優點：a 具有更小的相對分子質量和更高的拷貝數，平均每個細胞可達個拷貝b 具有MCS片段，可把具有兩種不同粘性末端的外源DNA片段直接克隆到pUC類載體上。2.6kbc 可以用組織化學方法檢測重組體（藍白斑篩選）.

pGEM載體總長度為2743bp   含有一個氨卞青黴素抗性編碼基因和一個lacZ』編碼基因

一段含有EcoR I、Sat I、Kpn I、Ava I、Sma I、BamH I、XbaI、Sall、AccI、Hinc I、Pst II、Sph I和Hind II等識別序列的多克隆位點。此序列結構幾乎與pUC18克隆載體的完全一樣。

pGEM系列與pUC系列之間的主要差別pGEM具有兩個來自噬菌體的啟動子，即T7啟動子和SP6啟動子，它們為RNA聚合酶的附著作用提供了特異性的識別位點。由於這兩個啟動子分別位於Lac z』基因中多克隆位點區的兩側，故若在反應體系中加入純化的識別T7或SP6啟動子的RNA聚合酶，便可將已克隆的外源基因在體外轉錄出相應的mRNA。質粒載體pGEM-3Z和pGEM-4Z在結構上基本相似，兩者之間的差別僅僅在於SP6和T7這兩個啟動子的位置互換、方向相反而已。pGEM 系列與pUC 系列之間的主要差別是，它具有兩個來自噬菌體的啟動子，即T7 啟動子和SP6 啟動子，它們為RNA 聚合酶的附著提供特異性識別位點。由於這兩個啟動子分別位於lacZ『 基因中多克隆位點區的兩側，若在反應體系中加入純化的T7 或SP6 RNA 聚合酶，便可以將已經克隆的外源基因在體外轉錄出相應的mRNA 。質粒載體pGEM-3Z 和pGEM-4Z 在結構上基本相似，兩者之間的差別僅僅在於SP6 和T7 這兩個啟動子的位置互換、方向相反而已。

pGEM-3Z：多拷貝裝有多克隆位點（MCS）正選擇顏色標記lacZ』   裝有兩個噬菌體的強啟動子用於外源基因的高效表達

注意：T7和SP6啟動子特異性地由噬菌體DNA編碼的RNA聚合酶所識別，因此相應的受體菌必須表達噬菌體RNA聚合酶，如：E.coli BL21（DE3）等

穿梭質粒載體這種質粒分子上含有兩個親緣關系不同的復制子結構以及相應的選擇性標記基因，因此能在兩種不同種屬的受體細胞中復制並檢測，例如既能在原核生物中復制,又能在真核生物中復制的載體。這類載體既具有細菌質粒的復制原點及選擇標記基因,還有真核生物的自主復制序列(ARS)以及選擇標記性狀通常穿梭載體在細菌中用於克隆,擴增克隆的基因,在酵母菌中用於基因表達分析.穿梭載體(shuttle vector)是指含有兩個親緣關系不同的復制子，能在兩種不同的生物中復制的。例如既能在原核生物中復制,又能在真核生物中復制的載體.這類載體不僅具有細菌質粒的復制原點及選擇標記基因,還有真核生物的自主復制序列(ARS)以及選擇標記性狀,具有多克隆位點.通常穿梭載體在細菌中用於克隆,擴增克隆的基因,在酵母菌中用於基因表達分析.61 

用Taq酶的PCR產物3』端加上了一個A。根據這一特點研製出一種線性質粒，其5』端突出的T，它們之間可以連接，即TA克隆。

When it comes to treating diseases like cancer, modern medicine has an impressive arsenal. And one of its most versatile weapons are Y-shaped proteins called monoclonal antibodies. Our immune systems already proce their own antibodies (plasma cell), they come in billions of variations, each matching a specific target, such as a particular toxin, bacteria or virus. When they bind to their target, they send a signal, this bacterium is now marked for destruction. These naturally- proced antibodies are pretty effective. In the 1970s, scientist figured out how to mass proce them.

E. 《基因傳（精裝版）眾生之源》pdf下載在線閱讀，求百度網盤雲資源

《基因傳（精裝版）》（[美]悉達多·穆克吉）電子書網盤下載免費在線閱讀

資源鏈接：

鏈接：

書名：基因傳（精裝版）

作者：[美]悉達多·穆克吉

譯者：馬向濤

豆瓣評分：8.6

出版社：中信出版社

出版年份：2018-4

頁數：620

內容簡介：

【內容簡介】

在整個20世紀，有三項顛覆性的科學概念和技術應用讓人類社會發展到了新的歷史階段：「原子」的發現帶來物理學的革命，「位元組」的發現帶來互聯網的革命，「基因」的發現帶來生物學的革命。

基因既是遺傳物質的基本單位，也是一切生物信息的基礎，破解了基因的運行機制，也就破解了生命的奧秘，人類的病理、行為、性格、疾病、種族、身份、命運也就有了更新的答案。如今，基因測序、基因克隆等基因技術迅速發展，人類基因組計劃也完成了全部人類基因的比對與測序工作，人類征服基因的時代已經到來。

《基因傳》罕見地完整講述了基因理論的起源、發展和未來，按照時間順序和故事情節展開，是一部反映基因發展史的傳記。

《基因傳》也是一部科學家們在探究基因奧秘的過程中攻堅克難的故事，像偵探小說一樣，以科學家們不斷遇到的新問題為線索步步深入，既深入淺出地梳理了基因理論的脈絡，又真實記錄了科學家們的合作與斗爭、成功與失敗。《基因傳》也講述了基因理論被政治歪曲利用導致的歷史災難和教訓，以及基因技術與制度、文化、倫理、道德的沖撞和博弈。有精彩故事，有人性糾葛，有歷史進退，《基因傳》是一部有溫度的、敘事高超的科普通識讀物。

人類從來沒有像今天這樣無限接近生命的真相，當我們能夠掌控和改造人類基因時，「人類」的概念也許將從根本上發生改變，後人類時代正在來臨。《基因傳》所講的故事，與每個人都息息相關。

《基因傳》出版後，迅速高居亞馬遜榜單，成為《紐約時報》暢銷書，《華盛頓郵報》《西雅圖時報》年度好書。

2010年，穆克吉的《眾病之王：癌症傳》詳盡記述了癌症的起源與發展以及人類對抗癌症、預防癌症的歷史，出版後獲得普利策文學獎，但是這本書不反映癌症病變之前生命的常態。如果癌症是人類身體發生病變之後的魔鬼，那麼是何種力量在此之前維系身體正常的新陳代謝呢？作者在癌症研究過程中意識到，只有了解事物的正反兩面才能深刻領悟其內在機制，於是，在探究常態與遺傳奧秘的過程中，作者創作了另一部更加深入人類命運源頭和顛覆生命認知的著作——《基因傳》。《癌症傳》講的是生命的病態，《基因傳》講的是生命的常態，因此《基因傳》可以被視為《癌症傳》的前傳。

——中信出版集團•見識城邦（《基因傳》出版者）

《基因傳》不僅是一部翔實記述（基因）科學發展的歷史，更是人類在21世紀面向未來的宣言。

——馬向濤（《基因傳》譯者）

見識叢書（見識城邦出品）：

《見識叢書01：時間地圖：大歷史，130億年前至今》[美]大衛•克里斯蒂安

《見識叢書02：太陽底下的新鮮事：20世紀人與環境的全球互動》 [美]約翰•R. 麥克尼爾

《見識叢書03：革命的年代：1789—1848》[英]艾瑞克•霍布斯鮑姆

《見識叢書04：資本的年代：1848—1875》[英]艾瑞克•霍布斯鮑姆

《見識叢書05：帝國的年代：1875—1914》[英]艾瑞克•霍布斯鮑姆

《見識叢書06：極端的年代：1914—1991》[英]艾瑞克•霍布斯鮑姆

《見識叢書07：守夜人的鍾聲：我們時代的危機和出路》[美]麗貝卡•D. 科斯塔

《見識叢書08：1913，一戰前的世界》[英]查爾斯•埃默森

《見識叢書09：文明史：人類五千年文明的傳承與交流》[法]費爾南•布羅代爾

《見識叢書10：基因傳：眾生之源》（平裝+精裝）[美]悉達多•穆克吉

《見識叢書11：一萬年的爆發：文明如何加速人類進化》[美]格雷戈里•柯克倫 [美]亨利•哈本丁

《見識叢書12：審問歐洲：二戰時期的合作、抵抗與報復》[美]伊斯特萬•迪克

《見識叢書13：哥倫布大交換：1492年以後的生物影響和文化沖擊》[美] 艾爾弗雷德•W. 克羅斯比

《見識叢書14：從黎明到衰落：西方文化生活五百年，1500年至今》（平裝+精裝）[美]雅克•巴爾贊

《見識叢書15：瘟疫與人》[美]威廉•麥克尼爾

《見識叢書16：西方的興起：人類共同體史》[美]威廉•麥克尼爾

《見識叢書17：奧斯曼帝國的終結：戰爭、革命以及現代中東的誕生，1908-1923》[美]西恩•麥克米金

《見識叢書18：科學的誕生：科學革命新史（上下冊）》（平裝+精裝）[美]戴維•伍頓

《見識叢書19：內戰，一部觀念史》[美] 大衛•阿米蒂奇

《見識叢書20：第五次開始》[美]羅伯特•L. 凱利

《見識叢書21：人類簡史：從動物到上帝》（精裝）[以]赫拉利•尤瓦爾

……後續新品，敬請關注……

【讀《基因傳》的N個理由：】

1. 不是所有寫基因的書你都能讀得懂。

2. 這本書所講的故事，和每個活生生的人都息息相關，你所有關於病理、行為、性格、疾病、種族、身份、命運的問題，都會在書中找到新的答案。

3. 你是誰？從哪裡來？到哪裡去？基因的發現，讓我們終於無限接近這些大問題的真實答案。

4. 這本書寫了3000年來人類對生命遺傳迭代奧秘的探索。

5. 為什麼人人相似卻又千差萬別？生命的演化過程里，是什麼在背後決定著這一切？這個問題困擾人類幾千年，從亞里士多德到達爾文，人類始終探索。直到20世紀50年代，科學家找到了基因，終於找到了破解生命奧秘的鑰匙。

6. 整本書寫了240位科學家們在探究基因奧秘的過程中攻堅克難的故事：

a. DNA雙螺旋的發現過程，驚心動魄，如大片一樣精彩。

b. 納粹德國利用「優生學」理論，讓集中營成了世人心中永恆的傷疤。

c. 你以為科學家之間都應該是「我好崇拜你啊」，但其實，他們可能即使合作也不忘記斗爭。

d. 一個在學校里表現「良好」的美國小女孩，卻和媽媽以及媽媽的媽媽一起被認定為「智障人士」。

e. 你以為你是女人，我以為我是男人，但基因說，我們可能都錯了。

7. 基因是沒有情感的，《基因傳》是有溫度的。

8. 如果非找一本類似的作品，就尤瓦爾赫拉利的《人類簡史》吧，《人類簡史》用嶄新的大歷史視角和高超的寫作手法，重述了人類從起源到今天的故事，《基因傳》也從宏大的視野和人類終極問題的關懷，用極講究的敘事手段，把基因的故事講了個通透。

9. 之前寫基因的書也不少，但都零零散散的，從來沒有像穆克吉這樣完整系統地梳理基因理論的起源、發展和未來，《基因傳》是一部知識密度極高的佳作。

10. 這不是生硬的科普書，作者同時把政治、歷史、人性、倫理、道德等議題穿插在里邊，是一部有厚度的作品。

11. 好看，真的好看，一個問題連著一個問題，科學家們抓住片段的線索和證據，一個一個攻破基因難題，像偵探小說一樣好看。

12. 這本書可以讓我們完整地了解基因的全部知識，關於基因，看這本就夠了。

13. 印度裔美國醫生，這樣的身份，讓作者的寫作別具一格。

14. 穆克吉的前一部作品《眾病之王：癌症傳》獲得普利策獎，他是個非常會講故事的人。

15. 未來，這本書關系所有人的未來！基因技術正在迅猛發展，基因測序、基因克隆、基因檢測、基因診斷、基因編輯……這些技術可以為我們帶來巨大好處，可以治癒疾病、預測未來、更新我們對性別、身份、選擇的認知，基因時代正在到來。但是，基因也涉及智力差異、種族歧視、倫理、道德，20世紀40年代納粹德國就歪曲利用了基因理論，製造了種族屠殺的災難。人類已經掌握了定向改造基因的技術，影響基因的功能，從而使身體狀態、生理機能甚至人類本身發生改變，那麼誰有權力支配它們並且確保安全呢？誰將成為此類技術的主導者，而誰又會成為它的犧牲品？當我們具備理解與掌握人類基因組的能力時，傳統意義上的「人類」概念也許將發生改變，後人類時代正在來臨。

16. 穆克吉很帥，嗯！

究其根本，人類不過是攜帶基因的載體與表達功能的通路。基因是自然界萬物生長的源泉，而我們就像是風馳電掣的賽馬，在轉瞬間前赴後繼薪火相傳。它們的組成與世間的善惡無關。同時也不會受到人情冷暖的影響。我們只是這些遺傳物質最終的表現形式。

——村上春樹《1Q84》

【名家推薦】

《紐約時報》暢銷書，2016年度精英閱讀書單

《華盛頓郵報》年度好書

《經濟學人》2016年度書單

《麻省理工科技評論》編輯部2016年度值得一讀的科技、科學類圖書

比爾•蓋茨（微軟公司創始人）

郝景芳 （童行計劃創始人，《北京折疊》作者）

姬十三（果殼網CEO、科學松鼠會創始人、神經生物學博士）

李開復（創新工場CEO、創新工場人工智慧工程院院長）

李清晨（醫生、科普作家、文津圖書獎獲獎作品《心外傳奇》作者）

梁小民（北京工商大學教授、經濟學家）

劉蘇里（北京萬聖書園創始人、知名學者）

吳國盛（清華大學科學史系主任）

尹燁（華大基因CEO，生命科學科普節目《天方燁談》主創）

張羽（醫學博士、副主任醫師，《只有醫生知道》作者）

安東尼•多爾（普利策獎得主，《所有我們看不見的光》作者）

保羅•伯格（諾貝爾化學獎得主）

雷德•霍夫曼（Reid Hoffman，LinkedIn創始人）

瑪麗亞•拉莫斯（Maria Ramos，英國巴萊克銀行南非子公司CEO）

聯袂推薦！

沒有人比他更適合帶領我們穿越基因科學的過去、現在和未來……同時，穆克吉還是一個優雅的、會講故事的人。

——比爾•蓋茨

決定人類未來命運的有兩件事，一個是人工智慧，另一個是基因科技。基因的發現、基因理論和技術的迅猛發展，讓人類有機會無限接近生命秘密的真相。穆克吉醫生的《基因傳》來得正是時候，完整梳理了基因理論和技術的起源、發展和未來，講述了科學家們攻堅克難的故事，以及基因技術對社會倫理、道德文化的邊界的觸碰，和他的前一部作品《癌症傳》一樣，豐滿而富有啟發性。我們對基因技術的未來充滿信心，正在到來的基因時代，有更多的可能讓人類克服疾病掌控自己的命運，不再聽天由命。

——李開復（創新工場CEO、創新工場人工智慧工程院院長）

基因的發現和發展揭開了生命的奧秘，將深刻影響我們人類社會的走向。穆克吉是集醫生、學者、科普作家於一身的印度裔美國人，他一方面掌握關於基因的科學知識，另一方面又能以科普作家的身份，把深奧難懂的知識以文學筆法呈現出來，有故事，有情節，讓人讀起來酣暢淋漓。

——姬十三（果殼網CEO、科學松鼠會創始人、神經生物學博士）

我推薦這本書，不僅在於它的確好，而且在於它的意義。尤瓦爾•赫拉利在紅遍全球的《未來簡史》中指出，人類未來的發展取決於兩門科學，一是人工智慧，二是生物工程。生物工程也被稱為基因工程。這門科學現在已用於制葯、基因檢測和基因重組。運用基因科學，我們能挽救人的生命，消除祖上遺傳而來的缺陷，這不是使人類未來更美好嗎？要了解基因科學的未來，一定要了解它的過去與今天，讀《基因傳》的意義就在於此。

——梁小民（北京工商大學教授、經濟學家）

作者在遠古的遐思、技術的進步與科學家個人命運的沉浮之間來回切換，收放自如，大開大合，向我們展示了一幅廣袤幽深的歷史長卷，是近年來不容忽視的科普佳作。

——李清晨（醫生、科普作家、文津圖書獎獲獎作品《心外傳奇》作者）

穆克吉是一位寶貴的既能做研究又能寫作的醫生，他讓深奧的醫學概念不再晦澀難懂，讓非專業人士也能感受到基因和遺傳學的美妙。希望《基因傳》的出版能讓更多人了解基因技術，這是現代醫學史上了不起的一筆。

——張羽（醫學博士、副主任醫師，《只有醫生知道》作者）

所有人都知道，基因科技對人類很重要，但是絕大多數人都只看到神奇的結果，看不到發生的過程。讀這本《基因傳》是非常有意思的過程，如曲徑通幽，不僅能看到新發現帶來的曙光，也能看到曙光被幽暗的密林遮蔽，而最後重新見到突破密林的光芒，讓人更理解科學探索的興奮。

——郝景芳（童行計劃創始人，《北京折疊》作者）

從第一個站起來的類人猿，到科技加身的現代人，我們從未停止對自身的好奇，對祖源的探究。基因是塑造人類的根本，我們對它的了解卻不足百年。《基因傳》從人文關懷的視角，對基因科學發展史展開描述，故事性強，情感豐富，鮮活地展現遺傳規律與基因的發現過程，啟發人類思考未來之路。真正威脅人類未來安危的不是科技脫韁的可能性，而是掌握科技的人如何選擇。康德說過兩樣讓人驚奇和敬畏的事，頭頂的星空和心中的道德定律。科學無止境的探索終將令驚奇不再，惟願人類對道德的敬畏之心永不改變。

——尹燁（華大基因CEO，生命科學科普節目《天方燁談》主創）

這不是一本僅介紹生物技術和常識的讀物，它最有價值的地方，是在人類社會歷史發展的宏觀框架下，從基因這個獨特視角，重新闡釋技術與制度、文化、倫理、道德之間的碰撞和博弈。

——大象公會

雖然很不願意承認，但在過去很長一段時間，中國的大多數醫生，尤其是數量龐大的基層醫生，都把治病看作處理好症狀，有平穩的生命體征即可。了解基因，可以幫助醫生更好地認識生命、拓展自己的職業邊界。《基因傳》的作者悉達多 • 穆克吉博士，因為有著腫瘤臨床與研究的「雙重」經歷，他的文字，讓臨床醫生可以從親切的角度，了解這個領域的內容。

——丁香園

如果你熱愛散文，這本書剛好合你胃口，如果你想明白關於基因編碼的事情——不是達到一個基因學博士的水平，但是足夠在飯桌上就這個話題掌控全局——那這本書適合你。這本書能讓你思考，但同時又能讓你迴避思考的重負。

——Saurabh Jha（醫學科普作家，皇家外科醫生）

這部作品也許可以被視為數千年來罕見的驚心動魄的偵探小說，而包括亞里士多德、孟德爾以及弗朗西斯•柯林斯在內的各位學者均為探究生命的奧秘做出了貢獻。作為《眾症之王：癌症傳》的姊妹篇，《基因傳》不僅繼承了氣勢磅礴的敘事風格，同時也成為超越前者的經典。如果你期望了解人類的現在與未來，那麼這本書就是不可或缺的佳作。

——安東尼•多爾（普利策獎得主，《所有我們看不見的光》作者）

2010年，悉達多•穆克吉醫生曾經以普利策獎獲獎作品《眾病之王：癌症傳》讓讀者為之陶醉，而現在看起來這不過是《基因傳》正式登場之前的熱身，他將本書打造成為集科學、歷史以及自傳為一身的史詩般作品，其廣度與深度堪比文學名著《失樂園》。

——《紐約時報》

（基因的）故事曾被人們用諸多不同的方式細致地描述過，但這次，穆克吉以一種罕見的宏偉視野講述了這部（基因的）新歷史。

——《紐約時報書評》

穆克吉通過感人至深的故事將抽象的科學概念娓娓道來……同時還在秉承醫學嚴謹的前提下以詩歌般的語言彰顯了人性中的柔情、脆弱以及光芒。

——《華盛頓郵報》

在穆克吉浪漫的敘事語境里，他雙眼犀利地指向那些矛盾的細節和尚未定論的諷刺之事。這位天才犀利地鎖定了化學抽象物中隱埋的情感真理，讓你感覺好像成功考過了一門你曾懼怕報名的大學課程，並且，你享受了這過程的每一分鍾。

——安德魯•所羅門（《正午惡魔》作者），《華盛頓郵報》

《基因傳》是一部承前啟後的生命科學思想史，作者以縝密的邏輯詮釋了當代廣受關注的科學問題。

——《今日美國》

《基因傳》不僅描繪了生命科學發展的壯美藍圖，同時也對傳統人類概念提出了道德與哲學挑戰。

——保羅•伯格（諾貝爾化學獎得主）

這部在現代格局下激進而又具有爭議性且有親和力的著作，是如此的扣人心弦。閱讀它，裝備好自己，來迎接未來的到來。

——布萊恩•艾波雅（《如何長生不老》作者），《周日泰晤士報》

他（穆克吉）對（基因的）歷史脈絡的釐清、引人入勝的講述，是他雄心壯志的彰顯，也是其不容磨滅的成就的見證。值得一提的是，他的書中沒有落下任何一個可信的、生動的調查。

——《衛報》

這是一部囊括了復雜思想的巨作……中文寫作細致，可讀性和趣味性都很強，可以說是所有科學革命中重要的作品之一。它註定會對我們的下一代產生根本性的影響。

——《觀察者》

《基因傳》探討了一個永恆而復雜的主題。實際上，它與我們每天的生活交織在一起，作者讓它與我們更加接近，更加扣人心弦。

——馬克•海登（《深夜小狗的神秘習題》作者）

作者簡介：

【作者簡介】

悉達多•穆克吉（Siddhartha Mukherjee），印度裔美國醫生、腫瘤專家、知名科普作家。

他曾就讀於牛津大學，並在斯坦福大學和哈佛大學取得醫學博士學位，他還是哥倫比亞大學醫學中心助理教授，他的研究主要集中在癌症治療和與血細胞有關的基因功能上。2010年，他出版著作《眾病之王：癌症傳》，並於次年榮獲普利策文學獎，《時代》雜志稱其為「1923年以來有影響力的100本英語書之一」。2016年，《基因傳》出版後，迅速高居亞馬遜榜單，成為《紐約時報》暢銷書，《華盛頓郵報》《西雅圖時報》年度好書。

【譯者簡介】

馬向濤，研究員/副主任醫師，畢業於北京大學並獲得外科學博士學位，長期從事外科腫瘤學臨床與基礎研究，翻譯了《基因傳》《腫瘤臨床試驗》等專著，曾經榮獲首都優秀醫務工作者獎章。馬向濤博士是北京市海淀區醫療資源統籌服務中心主任，同時還兼任《腫瘤防治研究》與《腫瘤研究與臨床》雜志編委，曾在《中華醫學雜志》《癌症》《醫學與哲學》等數十種國內外期刊上發表文章100餘篇。馬向濤博士致力於醫學人文傳播與健康知識科普，現在與家人生活在北京。（微信號：DRXIANGTAO，歡迎交流討論。）

F. 《餐桌上的轉基因食品》pdf下載在線閱讀，求百度網盤雲資源

《餐桌上的轉基因食品》（高薄超）電子書網盤下載免費在線閱讀

鏈接：https://pan..com/s/1OtWFiQivyt4WGwbSSo6WWg

書名：餐桌上的轉基因食品

作者：高薄超

出版社：中國社會科學出版社

出版年份：2004-1-1

頁數：151

內容簡介：

本書系統介紹了世界各國已經研製成功的轉基因動、植物食品,並分國別作了介紹,同時介紹了轉基因食品的發展現狀、方法、爭論、檢測技術、標識管理以及發展前景。

高溥超，中國科協自然科學學會會員，畢業於北京中醫學院醫療系，從醫二十餘年，科普作家。已出版著作：《天然化妝品配方700例》（1996年）、《美容化妝小竅門》（1999年）、《健康的誤區》（1999年）、《糖尿病食譜》（2000年）、《月經病飲》