❶ 免費下載pdf書的網站值得收藏的22個免費PDF電子書網站
⑴ 9個免費下載論文、教科書的網站推薦
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大學資源網主要學習資源有大學、中學、小學、管理課程、銷售培訓、資格考試、百家講壇、職業技能培訓等視頻教程,分類清晰,資源十分豐富。 網站致力於為所有想提高自己能力的人提供學習平台,所以不僅可以找教材,想自學的童鞋也可以利用這些網站來提高自己。
2、全國圖書館參考咨詢聯盟
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3、互聯網
維普網是中文科技期刊資源一站式服務平台,上傳發布各類學術和畢業論文陪蔽羨、各類範文、中小學課件、教學資料等各類作品,並在發布後為用戶提供下載服務,同時提供2000
4、OpenStax CNX
OpenStax CNX是志願者提供的教育內容的全球資源庫,OpenStax教科書的內容也保存在CNX中。
OpenStax CNX每月為數百萬用戶提供教育內容,以改善學習成果。
成千上萬的教科書式書籍可以在任何地方隨時隨地方便地訪問,並且可以從大多數設備上下載。
5、項目專家
又稱古騰堡計劃,資源儲備驚人,是目前最大的公益數字電子圖書館。蘆拍
這個項目以自由電子化的形式提供著作權過期的書。
古騰堡項目的官方網站提供了59000本完全免費的電子書。
同樣,不需要注冊賬戶,只需搜索想要的電子書,就可以從Project Gutenberg官網下載獲得豐富的電子書資源。
6、庫基因
網站界面簡潔易懂,輸入想找的關鍵詞或全名就可以搜索該領域的電子書。
請搜索一些科研電子書、教材,還有科研論文、小說、喜劇、行業標准、雜志等。
從這個網站上搜索可以找到書的很多版本。 大家根據自己的需求下載,真的有很多書。 教科書也可以在這里直接找到原件。 中文書籍也很豐富,我使用並很珍惜。
7、Academia
學院是一個專注於學術研究成果檢索與共享的網站,主要業務是學術論文檢索、科研成果跟蹤等,但學院上面有很多包括國內外在內的經典教科書。
特別是國內本科基礎學科教科書,如同濟大學版高等數學、線性代數等教材的電子版,收錄在Academia中。
8、開放訪問庫
OALib提供了4362064多篇開源論文,涵蓋了包括科學、科技、醫學、人文社科在內的所有領域。
所有文章都可以免費下載。
OALibJournal是同行評審學術雜志,發表在OALibJournal上的所有文章都保存在OALib上。
9、雜志lib
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外刊下載巨強,全站免費,更新及時,搜索全高清PDF,如the economist,即並笑可獲得最新經濟學雜志。 關鍵是點擊圖片找到下載按鈕就可以直接下載了。
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❷ ATAC-seq專題---生信分析流程
ATAC-seq信息分析流程主要分為以下幾個部分:數據質控、序列比對、峰檢測、motif分析、峰注釋、富集分析,下面將對各部分內容進行展開講解。
下機數據經過過濾去除接頭含量過高或低質量的reads,得到clean reads用於後續分析。常見的trim軟體有Trimmomatic、Skewer、fastp等。fastp是一款比較新的軟體,使用時可以用--adapter_sequence/--adapter_sequence_r2參數傳入接頭序列,也可以不填這兩個參數,軟體會自動識別接頭並進行剪切。如:
fastp \
--in1 A1_1.fq.gz \ # read1原始fq文件
--out1 A1_clean_1.fq.gz \ # read1過濾後輸出的fq文件
--in2 A1_2.fq.gz \ # read2原始fq文件
--out2 A1_clean_2.fq.gz \ # read2過濾後輸出的fq文件
--cut_tail \ #從3』端向5』端滑窗,如果窗口內鹼基的平均質量值小於設定閾值,則剪切
--cut_tail_window_size=1 \ #窗口大小
--cut_tail_mean_quality=30 \ #cut_tail參數對應的平均質量閾值
--average_qual=30 \ #如果一條read的鹼基平均質量值小於該值即會被舍棄
--length_required=20 \ #經過剪切後的reads長度如果小於該值會被舍棄
fastp軟體的詳細使用方法可參考:https://github.com/OpenGene/fastp。fastp軟體對於trim結果會生成網頁版的報告,可參考官網示例http://opengene.org/fastp/fastp.html和http://opengene.org/fastp/fastp.json,也可以用FastQC軟體對trim前後的數據質量進行評估,FastQC軟體會對單端的數據給出結果,如果是PE測序需要分別運行兩次來評估read1和read2的數據質量。
如:
fastqc A1_1.fq.gz
fastqc A1_2.fq.gz
FastQC會對reads從鹼基質量、接頭含量、N含量、高重復序列等多個方面對reads質量進行評估,生成詳細的網頁版報告,可參考官網示例:http://www.bioinformatics.babraham.ac.uk/projects/fastqc/good_sequence_short_fastqc.html
經過trim得到的reads可以使用BWA、bowtie2等軟體進行比對。首先需要確定參考基因組fa文件,對fa文件建立索引。不同的軟體有各自建立索引的命令,BWA軟體可以參考如下方式建立索引:
bwa index genome.fa
建立好索引後即可開始比對,ATAC-seq推薦使用mem演算法,輸出文件經samtools排序輸出bam:
bwa mem genome.fa A1_clean_1.fq.gz A1_clean_2.fq.gz
| samtools sort -O bam -T A1 > A1.bam
值得注意的是,在實驗過程中質體並不能完全去除,因此會有部分reads比對到質體序列上,需要去除比對到質體上的序列,去除質體序列可以通過samtools提取,具體方法如下:首先將不含質體的染色體名稱寫到一個chrlist文件中,一條染色體的名稱寫成一行,然後執行如下命令即可得到去除質體的bam
samtools view -b A1.bam $chrlist > A1.del_MT_PT.bam
用於後續分析的reads需要時唯一比對且去重復的,bwa比對結果可以通過MAPQ值來提取唯一比對reads,可以用picard、sambamba等軟體去除p,最終得到唯一比對且去重復的bam文件。
比對後得到的bam文件可以轉化為bigWig(bw)格式,通過可視化軟體進行展示。deeptools軟體可以實現bw格式轉化和可視化展示。首先需要在linux環境中安裝deeptools軟體,可以用以下命令實現bam向bw格式的轉換:
bamCoverage -b A1.bam -o A1.bw
此外,可以使用deeptools軟體展示reads在特定區域的分布,如:
computeMatrix reference-point \ # reference-pioint表示計算一個參照點附近的reads分布,與之相對的是scale-regions,計算一個區域附近的reads分布
--referencePoint TSS \#以輸入的bed文件的起始位置作為參照點
-S A1.bw \ #可以是一個或多個bw文件
-R gene.bed \ #基因組位置文件
-b 3000 \ #計算邊界為參考點上游3000bp
-a 3000 \ #計算邊界為參考點下游3000bp,與-b合起來就是繪制參考點上下游3000bp以內的reads分布
-o A1.matrix.mat.gz \ #輸出作圖數據名稱
#圖形繪制
plotHeatmap \
-m new_A1.matrix.mat.gz \ #上一步生成的作圖數據
-out A1.pdf \ # 輸出圖片名稱
繪圖結果展示:
MACS2能夠檢測DNA片斷的富集區域,是ATAC-seq數據call peak的主流軟體。峰檢出的原理如下:首先將所有的reads都向3'方向延伸插入片段長度,然後將基因組進行滑窗,計算該窗口的dynamic λ,λ的計算公式為:λlocal = λBG(λBG是指背景區域上的reads數目),然後利用泊松分布模型的公式計算該窗口的顯著性P值,最後對每一個窗口的顯著性P值進行FDR校正。默認校正後的P值(即qvalue)小於或者等於0.05的區域為peak區域。需要現在linux環境中安裝macs2軟體,然後執行以下命令:
macs2 callpeak \
-t A1.uni.dep.bam \ #bam文件
-n A1 \ # 輸出文件前綴名
--shift -100 \ #extsize的一半乘以-1
--extsize 200 \ #一般是核小體大小
--call-summits #檢測峰頂信息
註:以上參數參考文獻(Jie Wang,et.al.2018.「ATAC-Seq analysis reveals a widespread decrease of chromatin accessibility in age-related macular degeneration.」Nature Communications)
ATAC分析得到的peak是染色質上的開放區域,這些染色質開放區域常常預示著轉錄因子的結合,因此對peak區域進行motif分析很有意義。常見的motif分析軟體有homer和MEME。以homer軟體為例,首先在linux環境中安裝homer,然後用以下命令進行motif分析:
findMotifsGenome.pl \
A1_peaks.bed \ #用於進行motif分析的bed文件
genome.fa \ #參考基因組fa文件
A1 \ #輸出文件前綴
-size given \ #使用給定的bed區域位置進行分析,如果填-size -100,50則是用給定bed中間位置的上游100bp到下游50bp的區域進行分析
homer分析motif的原理及結果參見:http://homer.ucsd.e/homer/motif/index.html
根據motif與已知轉錄因子的富集情況可以繪制氣泡圖,從而可以看到樣本與已知轉錄因子的富集顯著性。
差異peak代表著比較組合染色質開放性有差異的位點,ChIP-seq和ATAC-seq都可以用DiffBind進行差異分析。DiffBind通過可以通過bam文件和peak的bed文件計算出peak區域標准化的readcount,可以選擇edgeR、DESeq2等模型進行差異分析。
在科研分析中我們往往需要將peak區域與基因聯系起來,也就是通過對peak進行注釋找到peak相關基因。常見的peak注釋軟體有ChIPseeker、homer、PeakAnnotator等。以ChIPseeker為例,需要在R中安裝ChIPseeker包和GenomicFeatures包,然後就可以進行分析了。
library(ChIPseeker)
library(GenomicFeatures)
txdb<- makeTxDbFromGFF(『gene.gtf』)#生成txdb對象,如果研究物種沒有已知的TxDb,可以用GenomicFeatures中的函數生成
peakfile <-readPeakFile(『A1_peaks.narrowPeak』)#導入需要注釋的peak文件
peakAnno <- annotatePeak(peakfile,tssRegion=c(-2000, 2000), TxDb=txdb)
# 用peak文件和txdb進行peak注釋,這里可以通過tssRegion定義TSS區域的區間
對於peak注釋的結果,也可以進行可視化展示,如:
p <- plotAnnoPie(peakAnno)
通過注釋得到的peak相關基因可以使用goseq、topGO等R包進行GO富集分析,用kobas進行kegg富集分析,也可以使用DAVID在線工具來完成富集分析。可以通過挑選感興趣的GO term或pathway進一步篩選候選基因。
❸ 人教版生物八年級下復習資料
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